سنجش بیان آنزیم اورات اکسیداز

اورات اکسیداز (Uox; EC۱.۷.۳.۳)، که به عنوان اوریکاز نیز شناخته می شود، اکسیداسیون اسید اوریک را به آلانتوئین کاتالیزمی کند که حدود ۵ تا ۱۰ برابر از اسیداوریک محلول تر است، بنابراین دفع آن از طریق کلیه بهتر صورت می گیرد. همچنین اوریکازبه عنوان یک عامل تشخیصی برای تعیین سطح اسید اوریک در نمونه های بیولوژیکی استفاده می شود. به طور طبیعی میزانحلالیت اسید اوریک در خون کم است و یکسان نبودن میزان تولید و تجزیه اوریک اسید باعث تجمع بیش از حد آن در بدن وبروز بیماری های مختلف از جمله نقرس , نارسایی کلیوی و... می شود. ژن کد کنندهی این آنزیم توسط جهش هایی در انسان وبقیهی پریمات ها غیرفعال شده است بنابراین اوریکاز می تواند به عنوان یک آنزیم دارویی برای کاهش میزان اسید اوریک موجوددر مایعات بیولوژیکی از جمله خون مورد استفاده قرار بگیرد. از این رو، با توجه به خصوصیات فیزیکوشیمیایی پروتئین ها و باتوجه به اهمیت بالای آنزیم اوریکاز در پیشگیری و درمان بیماری های مختلف و قیمت بالای این داروی وارداتی، آنزیم اوریکاز درباکتری اشریشیا کلی، ترانسفرم، بیان و تخلیص شد. سپس برای حصول اطمینان از خلوص نمونه ها تکنیک الکتروفورز -PAGESDS، به کار رفت که یک روش آزمایشگاهی متداول برای جداسازی مولکول های مختلف است. ژل مورد استفاده در این روش از آگارز و پلی آکریل آمید ساخته می شود که به دلیل متخلخل بودن به مولکول های مختلف با اندازه های متفاوت اجازه عبور میدهد که با افزایش و کاهش غلظت ژل ها میتوان بستر مناسبی را برای عبور پروتئین ها به وجود آورد. در این روش پس از ساختنژل پایین و بالا، نمونه های مورد نظر را درون چاهک های ایجاد شده وارد کرده و به آن ها جازه ی حرکت می دهیم سپس درآخر برای رنگ کردن و مشخص شدن باند های ایجاد شده از محلول رنگ و رنگ بر استفاده میکنیم. برا اطمینان از باند های ایجادشده می توان از یک Lader استفاده کرد هرچه باند ایجاد شده واضح تر و پررنگ تر باشد نشانه ی خلوص و بیان بهتر پروتئین مورد نظر است.